לעמותה 25,000 חברים והם המשאב העיקרי של העמותה: רבים מהם חברים בצוותים המקומיים הפועלים לקידום תחבורת אופניים במקום יישובם. רבים אחרים פעילים בצוותים הנושאיים (תכנון, בטיחות בדרכים, לובי, מדיניות ציבורית, רוכבים לעבודה, שבילים בטוחים לבתי הספר, בריאות ציבור, תקשורת, אירועים, סיוע משפטי, אינטרנט, לימוד רכיבה, מלחמה בגנבות האופניים, אופניים ותחבורה ציבורית, אופני הרים , אופני כביש ועוד)

ישראל בשביל אופניים פועלת ברמות שונות:
במישור הארצי, יזום וקידום הצעת חוק בכנסת לעידוד תחבורת אופניים, לובי להשגת תקציבים לרשויות מקומיות מול משרדי ממשלה, כנסת ישראל, פעילות בשיתוף קופות החולים, עמותות, חברות וארגונים.
קידום תוכנית מתאר ארצית לאופניים, פעילות מול מע"צ להסדרת הרכיבה לאורך כבישים בין-עירוניים.
במישור העירוני, שותפות וליווי של למעלה מ- 100 רשויות מקומיות שונות המקדמות את נושא תחבורת האופניים.
במישור הציבורי, פעילות העמותה עם תושבים, בתי ספר, ארגונים וחברות עסקיות, קיום אירועים ציבוריים והפעלת שלוש תוכניות התערבות: "רוכבים לעבודה", "שבילים בטוחים לביה"ס" ו"רוכבים בטוח".